取50mL离心管加入10mL小鼠外周血淋巴细胞分离液,上层加入10mL细胞悬液,离心收集沉淀(2000r/min,10min...
8.加入无血清培养液 5 ml,冲散细胞,再离心一次,弃上清液。 9.加入含血清的培养液 1~2 ml (视细胞量加入),血球计数板计数。 10.将细胞调整到 5x105/ml 左右,转移至 6 孔培养板中,37℃ 下培养。 四、注意事项 1.处理小鼠肝组织时,全程进行无菌...
8.加入无血清培养液 5 ml,冲散细胞,再离心一次,弃上清液。 9.加入含血清的培养液 1~2 ml (视细胞量加入),血球计数板计数。 10.将细胞调整到 5x105/ml 左右,转移至 6 孔培养板中,37℃ 下培养。 四、注意事项 1.处理小鼠肝组织时,全程进行无菌操作,防止引入污染。 2.控制胰酶消化时间,防止过度消化。 ...
3. 不同的细胞类型需要选择适合其生长的培养基,不能通用。四、培养肝细胞在完成肝细胞的分离、器材的准备和培养基的配制后,可以进行肝细胞的培养。具体步骤如下: 1. 将分离得到的肝细胞悬液加入培养皿中,放入37℃恒温培养箱中培养。 2. 第一天不需要更换培养基,第二天更换一次培养基。 3. 每2-3...
1.处理小鼠肝组织时,全程进行无菌操作,防止引入污染。 2.控制胰酶消化时间,防止过度消化。 3.选择合适的滤网过滤,以除去组织块。 4.在 37℃ 培养箱中培养肝细胞,及时观察细胞状态,根据实际情况进行调整和处理。 小鼠肝细胞培养实验易做难精,熟练掌握的前提是多练多思考,掌握技巧后就不是难事!
一、大鼠肝细胞的培养技术 1. 细胞来源 大鼠肝细胞可以通过胎鼠、新生鼠等不同的来源获取。在获取细胞之前,需要经过严格的消毒和清洁操作以确保实验室环境的无菌。在取材时,需要将鼠取出,将其胸腔进行高温灭菌,然后迅速取出肝脏。2. 细胞分离和培养 将取出的肝脏进行细胞分离和培养,流程如下:(1)将肝脏在PB...
原代培养是建立各种细胞系的第一步,是从事培养工作人员应熟悉和掌握的最基本的技术。根据培养方法不同原代培养分为组织块培养法和单层细胞培养法。学习文档6/27/2021 仪器:培养箱(调整至37℃)、培养皿、解剖器械、倒置相差显微镜。材料:胎鼠或新生小鼠。试剂:DMEM培养基(含血清10%)、0.25%胰蛋白 酶、75%...
小鼠肝细胞原代培养实验小鼠肝细胞原代培养实验 一、实验材料准备 1. 动物:小鼠。 2. 试剂:DMEM(含血清)、无血清DMEM 培养基、胰酶、PBS 。 3. 器械:饭盒、纱布、小剪子、小镊子、大镊子、大烧杯、平皿、研磨玻片、滤网、离 心管(15/50 ml)、6孔培养板、吸管、移液管、手套、微量加样器。 4. 准备:...
小鼠原代肝细胞培养14鼠肝细胞单层培养动物和肝组织处理同上加入消化液置4过夜消化去除消化液加含100mllbs培养液用滴管轻轻吹打成细胞悬液经200目尼龙筛网过滤后用培养液洗2离心4min收集肝细胞台盼蓝活细胞计数80按5105ml密度接种于375co2条件下培养待细胞贴壁生长后改为50mllbs培养液 一种改良的小鼠原代肝细胞培养...
✦原代培养 一、准备工作 1、仪器设备 CO2 培养箱、双人单面超净台、倒置显微镜、台式冷冻离心机、水浴锅(abs72023)或水浴摇床,医用冰箱、-80℃冰箱、移液器(一套)、眼科剪、眼科镊。 2、试剂耗材 小鼠正常肝类器官培养基(abs9539),基质胶(低因子、无酚红)(abs9495),60mm细胞培养皿(abs7005), 100μm滤筛...